方案優(yōu)勢(shì)

重現(xiàn)性良好

采用標(biāo)準(zhǔn)

GB/T17813.7-1999《復(fù)合預(yù)混料中煙酸、葉酸的測(cè)定 高效液相色譜法》

方法/原理/步驟

　　色譜條件

　　色譜柱：HitachiLaChromC18(5μm)4.6mmI.D.x250mmL

　　柱溫：30℃

　　流速：1.0mL/min

　　波長(zhǎng)：275nm

　　進(jìn)樣量：20μL

　　流動(dòng)相：取500mL去離子水，加10mL冰乙酸，1.3mL三乙胺，20mL己烷磺酸鈉(0.005mol/L),用去離子水定容至1L，調(diào)pH=3.2，過濾；取上述溶液850mL與150mL甲醇混合，脫氣。

　　溶液制備

　　煙酸貯備液：準(zhǔn)確稱取約25mg煙酸置25mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容；

　　葉酸貯備液：準(zhǔn)確稱取約25mg葉酸置25mL容量瓶中，用0.1mol/L碳酸鈉溶液溶解并定容；

　　分別移取一定量煙酸和葉酸貯備液，用流動(dòng)相稀釋成濃度為10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用0.45μm濾膜過濾，進(jìn)樣測(cè)定。

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　1、標(biāo)樣測(cè)定

　　根據(jù)GB/T17813.7-1999的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，煙酸出峰時(shí)間為3.84min，葉酸出峰時(shí)間為30.86min，圖1為混合標(biāo)樣的色譜圖。

　　圖1混合標(biāo)樣色譜圖

　　2、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

　　對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液重復(fù)進(jìn)樣，煙酸6次進(jìn)樣峰面積的RSD為0.22%，葉酸6次進(jìn)樣峰面積的RSD為0.11%，重現(xiàn)性良好，結(jié)果見下表：

　　表1煙酸峰面積的重現(xiàn)性結(jié)果

　　表2葉酸峰面積的重現(xiàn)性結(jié)果

　　3、飼料樣品檢測(cè)

　　某品牌維生素預(yù)混飼料經(jīng)前處理后測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果見圖2。

　　圖2預(yù)混飼料樣品色譜圖

　　結(jié)論

　　采用日立高效液相色譜儀Primaide四元梯度系統(tǒng)配紫外檢測(cè)器，在上述色譜條件下，煙酸和葉酸峰面積的重現(xiàn)性良好；并可以對(duì)飼料實(shí)際樣品中的煙酸和葉酸進(jìn)行定性和定量，紫外檢測(cè)器靈敏度高，適用于常規(guī)定量測(cè)定。

儀器設(shè)備

　　儀器

　　1)四元梯度泵PM1110

　　2)自動(dòng)進(jìn)樣器PM1210

　　3)柱溫箱PM1310

　　4)紫外檢測(cè)器PM1410

　　5) PSM色譜工作站。