方案優(yōu)勢

HPLC是近幾年發(fā)展起來的檢測土霉素的方法，主要是采用反相分析系統(tǒng)，使用紫外檢測器檢測，HPLC方法具有快速、高效、靈敏、定量準(zhǔn)確的優(yōu)點，而且不受樣品的沸點、熱穩(wěn)定性和分子量等的限制，已經(jīng)成為檢測土霉素的主要測定方法。

采用標(biāo)準(zhǔn)

GB/T22259-2008《飼料中土霉素的測定高效液相色譜法》

方法/原理/步驟

　　色譜條件

　　色譜柱：Hitachi LaChrom C18(5μm) 4.6mmI.D.x250mmL

　　柱溫：45℃

　　流速：1.0 mL/min

　　檢測波長：353nm

　　進(jìn)樣量：20μL

　　流動相：0.01M磷酸二氫鈉(pH=3.5)：乙腈=86:14

　　?溶液制備

　　稱取一定量土霉素標(biāo)準(zhǔn)品于10ml容量瓶，用0.05M鹽酸溶解并定容，作為制備液；然后稀釋得到濃度為15μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用0.45μm濾膜過濾，進(jìn)樣測定。

　　稱取10g飼料樣品于250mL具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入100ml 0.05mol/L鹽酸溶液，超聲提取10min后靜置，取上清液于離心管中，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，用0.45μm濾膜過濾，進(jìn)樣測定。

儀器設(shè)備

　　儀器

　　1)四元梯度泵PM1110

　　2)自動進(jìn)樣器PM1210

　　3)柱溫箱PM1310

　　4)紫外檢測器PM1410

　　5) PM色譜工作站。

實驗結(jié)果

　　1、標(biāo)樣測定

　　根據(jù)GB/T22259-2008的色譜條件，調(diào)節(jié)乙腈和磷酸緩沖液的比例，在乙腈：緩沖鹽=14:86的條件下，土霉素和雜質(zhì)峰的分離很好，因此選擇該比例進(jìn)行實驗，出峰時間為9.767min，圖1為土霉素標(biāo)樣的色譜圖。

　　圖1土霉素標(biāo)樣色譜圖

　　2、檢出限

　　對土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋，進(jìn)樣測定，在信噪比S/N=3時得到土霉素的檢出限為0.025μg/ml。

　　圖2檢出限色譜圖

　　3、重復(fù)性實驗

　　對土霉素標(biāo)樣溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，6針峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.32%，重現(xiàn)性較好，結(jié)果見下表：

　　表1土霉素標(biāo)樣6針峰面積的重現(xiàn)性

　　4、飼料樣品檢測

　　某仔豬飼料經(jīng)前處理后測定，在9.767min未檢測到土霉素殘留，實驗結(jié)果見圖3。

　　圖3飼料樣品與加標(biāo)樣品重疊色譜圖

結(jié)論

　　采用日立Primaide高效液相色譜儀四元梯度配紫外檢測器，在上述色譜條件下，準(zhǔn)確測定了土霉素的含量，并和其他雜質(zhì)得到很好的分離，重現(xiàn)性良好，最低檢測限可達(dá)到0.025μg/ml；對飼料樣品中該項目進(jìn)行了檢測，未檢出殘留。該方法簡便實用，適用于常規(guī)限量檢測。