方案優(yōu)勢

飼料中金霉素含量測定，目前常用的測定方法有高效液相色譜法(HPLC)和微生物法。微生物法較為經(jīng)典、成本低，但受一些有抗菌活性雜質(zhì)影響，金霉素含量不一定準(zhǔn)確。高效液相色譜法靈敏度高、專屬性強(qiáng)，能夠更好地控制四環(huán)素、差向金霉素等雜質(zhì)的含量。

采用標(biāo)準(zhǔn)

GB/T19684-2005《飼料中金霉素的測定高效液相色譜法》

方法/原理/步驟

　　色譜條件

　　色譜柱：Hitachi LaChrom C18(5μm) 4.6mmI.D.x250mmL

　　柱溫：25℃

　　流速：1.0 mL/min

　　檢測波長：375nm

　　進(jìn)樣量：20μL

　　流動相：0.01M草酸水溶液：乙腈:甲醇=77：18：5

　　溶液制備

　　準(zhǔn)確稱取一定量金霉素標(biāo)樣于10ml容量瓶，用甲醇溶解并定容，作為貯備液；然后稀釋得到濃度為10μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用0.45μm濾膜過濾，進(jìn)樣測定。

　　準(zhǔn)確稱取10g飼料樣品于250mL具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入100ml 0.05mol/L鹽酸溶液，超聲提取10min后靜置，取上清液于離心管中，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，用0.45μm濾膜過濾，進(jìn)樣測定。

儀器設(shè)備

　　儀器

　　1)四元梯度泵PM1110

　　2)自動進(jìn)樣器PM1210

　　3)柱溫箱PM1310

　　4)紫外檢測器PM1410

　　5) PM色譜工作站。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　1、標(biāo)樣測定

　　根據(jù)GB/T19684-2005的色譜條件，調(diào)節(jié)乙腈、甲醇和草酸溶液的比例，在草酸水溶液：乙腈:甲醇=77 : 18 : 5的條件下，實(shí)際樣品中金霉素和雜質(zhì)峰的分離很好，因此選擇該比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，出峰時間為9.66min，圖1為金霉素標(biāo)樣的色譜圖。

　　圖1金霉素標(biāo)樣色譜圖

　　2、檢出限

　　對標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋，在信噪比S/N=3時得到金霉素的檢出限為0.05μg/ml。

　　圖2檢出限色譜圖

　　3、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

　　對金霉素標(biāo)樣溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，6針峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13%，重現(xiàn)性很好，結(jié)果見下表

　　表1金霉素標(biāo)樣6針峰面積的重現(xiàn)性

　　4、飼料樣品檢測

　　豬飼料經(jīng)前處理后測定，在9.66min未檢測到金霉素殘留，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。

　　圖3飼料樣品與加標(biāo)樣品重疊色譜圖

結(jié)論

　　采用日立Primaide高效液相色譜儀四元梯度配紫外檢測器，準(zhǔn)確地測定了金霉素的含量，在上述色譜條件下和雜質(zhì)得到很好的分離，重現(xiàn)性良好，最低檢測限可達(dá)到0.05μg/ml；對飼料樣品中該項(xiàng)目進(jìn)行了檢測，未檢出金霉素殘留，方法簡便實(shí)用，紫外檢測器靈敏度高，適用于常規(guī)限量檢測。