方案優(yōu)勢

實現(xiàn)龜甲膠藥材的 快速、準(zhǔn)確、靈敏的定性分析。

采用標(biāo)準(zhǔn)

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

方法/原理/步驟

　　分析條件

　　液相條件

　　色譜柱：Shim-pack XR-ODS III 2.0 mmI.D.×100 mm L., 2.2μm

　　流動相：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-乙腈

　　流速：0.3 mL/min

　　柱溫：35℃

　　進(jìn)樣量：5μL

　　洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為5%，洗脫程序見表1。

　　質(zhì)譜條件

　　離子化模式：ESI,正離子模式

　　離子噴霧電壓：+4.5 kV

　　霧化氣流速：氮?dú)?.0 L/min

　　干燥氣流速：氮?dú)?5 L/min

　　碰撞氣：氬氣

　　DL溫度：250℃

　　加熱模塊溫度：400℃

　　掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)

　　駐留時間：100 ms

　　延遲時間：3 ms

　　MRM參數(shù)：見表2

　　對照品和樣品配制及前處理方法

　　取對照藥材或待測樣品粉末0.1 g，加入1%碳酸氫銨溶液50 mL，超聲處理30 min，用微孔濾膜濾過。參照《中國藥典(2015版)》龜甲膠項下，取濾液100μL，置于進(jìn)樣瓶中，加入胰蛋白酶溶液10μL(用1%碳酸氫銨溶液配制成濃度為1 mg/mL的胰酶溶液)，搖勻，37℃恒溫酶解12小時，作為對照藥材溶液或供試液。

　　結(jié)果與討論

    龜甲膠對照藥材的MRM色譜圖

　　LCMS分析獲得龜甲膠對照藥材特征多肽的MRM色譜圖，保留時間10.85 min，圖1中兩對特征離子對631.40>546.20以及631.40>921.40的信噪比分別為127479和7451，充分滿足藥典中要求的色譜峰信噪比大于3:1的要求。

　　實際樣品分析

　　對兩種市售龜甲膠藥材樣品進(jìn)行分析，結(jié)果如圖2、3和表3所示。

儀器設(shè)備

　　島津超高效液相色譜儀LC-30A
一、 使用小粒徑的填料
      通過這個方法將使快速分離成為可能。但是，由于色譜柱里流動阻力的增加，儀器各部件和色譜柱所承受的壓力也將顯著地增加。
二、 高溫分離
      較高的溫度可以加速物質(zhì)的擴(kuò)散，同時可以減小色譜柱里的流動阻力，也使得快速分離成為可能。高溫分析在降低柱壓方面很有效，但是高溫引起色譜柱的劣化、導(dǎo)致樣品分解等不足在應(yīng)用時需要引起注意。