方案優(yōu)勢

在系統(tǒng)優(yōu)化的基礎上，采用常規(guī)的C18色譜柱，實現(xiàn)了15種紫外線吸收劑的全部基線分離，方法定量準確，便于推廣普及，為防曬類化妝品的質量安全監(jiān)管提供了實用有效的檢測方法。

采用標準

相關標準

方法/原理/步驟

　　標準溶液的配制

　　準確稱取各紫外線吸收劑標準品50mg(精確至0. 1mg)于50mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，即得1g／L的標準儲備液，保存于4℃條件下；分別準確量取1mL各標準儲備液至20mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成50mg／L的混合標準儲備液，再用甲醇逐級稀釋成20、10、5、2、1、0. 5、0. 2mg／L的混合標準工作溶液。

　　樣品前處理

　　對于除唇膏外易于分散的試樣：稱取0. 5g(精確至0. 001g)試樣于25mL具塞比色管中，向比色管中加入4mL四氫呋喃(含2g／L氫氧化銨)，渦旋振蕩混勻，再加入80%(v／v)甲醇水溶液定容至10mL，渦旋混勻，然后超聲提取10min。取部分提取溶液轉移至10mL具塞塑料離心管中，以10 000r／min離心10min，取2mL上清液經(jīng)氮吹儀吹掃近干后，用2mL甲醇重新溶解，經(jīng)0. 45μm微孔濾膜過濾后進行測定。

　　對于唇膏等不易分散的蠟質試樣：加入4mL四氫呋喃(含2g／L氫氧化銨)，渦旋振蕩，如仍不能使試樣完全分散，可采用超聲振蕩加熱(50℃)的方式使試樣分散完全，然后向比色管中加入80%(v／v)甲醇水溶液，定容至10mL，后續(xù)步驟與其他樣品相同。

　　液相色譜條件

　　色譜柱：WatersXTerraMSC1(8 250mm×4. 6mm，5μm)；流動相：A相為水(含0. 1%(v／v)甲酸)，B相為甲醇(含0. 1%(v／v)甲酸)；流速：1mL／min；柱溫：25℃；進樣量：10μL；梯度洗脫程序：0~5min，55%A~25%A；5~8min，25%A~22%A；8~10min，22%A；10 ~ 20min，22%A~ 10%A；20 ~ 21min，10%A~ 5%A；21 ~ 23min，5%A；23 ~ 24min，5%A~55%A；24~28min，55%A。檢測波長：280nm和311nm。

　　樣品前處理條件的優(yōu)化

　　本實驗采用不同體積分數(shù)(50%、60%、70%、80%、90%)的甲醇水溶液對空白加標試樣中的目標物質進行提取。結果表明，除唇膏等蠟質試樣外，其他基質類型樣品在高甲醇含量的水溶液提取條件下，仍有部分目標物質的提取效率不高，而且唇膏等蠟基質試樣用甲醇也無法分散完全，從而導致目標物質回收率較低。針對該問題，本實驗在試樣中首先加入四氫呋喃分散樣品，然后加入80%(v／v)甲醇水溶液進行提取的方法進行樣品中目標物質的提取。實驗結果顯示，除唇膏類樣品外，其他基質類型化妝品試樣在4mL四氫呋喃及6mL80%(v／v)甲醇水溶液提取條件下所有目標物質均有較高的回收率。而對于某些唇膏等蠟基質類型樣品，加入四氫呋喃后仍不能使其分散完全，因此本實驗采用振蕩加熱至50℃的方式使唇膏等基質分散完全，結果顯示，此條件下試樣分散效果較好，目標物質的回收率達到滿意的效果。

　　當降低空白加標水平至0. 1%(質量分數(shù))以下時，除2-苯基苯并咪唑-5-磺酸回收率較低外，其他目標物質的回收率均達到80%以上。根據(jù)2-苯基苯并咪唑-5-磺酸的化學結構式，其帶有磺酸基，在中性條件下為解離狀態(tài)，離子狀態(tài)使得其增加了在水相中的溶解度，從而導致其回收率偏低。因此，在提取溶劑中加入流動相中常添加的酸性改性劑甲酸來抑制2-苯基苯并咪唑-5-磺酸中磺酸基團的解離。實驗結果顯示，在該物質含量較低時，可以顯著提高目標物質回收率；但在高濃度時，回收率仍偏低?？紤]到該物質在氨化甲醇中有良好的溶解度，因此本實驗又考察了在四氫呋喃中添加不同濃度的氫氧化銨條件下各物質的回收率效果。實驗結果表明，添加2g／L氫氧化銨可使得2-苯基苯并咪唑-5-磺酸的回收率明顯提高，而且其他物質的回收率均不受影響。因此，最終確定采用4mL含2g／L氫氧化銨的四氫呋喃溶液預處理試樣，然后加入6mL80%甲醇水溶液進行提取的前處理條件。

　　液相色譜條件的優(yōu)化

　　1.色譜柱的選擇

　　色譜柱的種類對分析結果有至關重要的影響，C18柱和苯基柱是實驗室常用的反相色譜柱。因采用不同的鍵合技術和硅羥基封端基團的不同，雖同為C18填料，但其選擇性存在區(qū)別。本實驗中選擇了WatersXTerraC18、AgilentZorbaxSB-Phenyl、大連依利特公司的KromasilC18、AgilentZorbaxSBC18 4種不同品牌、選擇分離性存在差異的色譜柱(規(guī)格均為250mm×4. 6mm，5μm)分別進行梯度洗脫條件優(yōu)化。結果表明，二苯酮-1、二苯酮-8和二苯甲酮在AgilentZorbaxSB-Phenyl和KromasilC18色譜柱上難以分離；而AgilentZorbaxSBC18對水楊酸乙基己酯和胡莫柳酯的色譜分離存在難度；在WatersXTerraC18柱上經(jīng)梯度洗脫條件的優(yōu)化，實現(xiàn)了15種紫外線吸收劑的全部基線分離。

　　2.流動相的選擇

　　實驗發(fā)現(xiàn)，異丙醇由于黏度較高，容易引起色譜系統(tǒng)的壓力上升，造成基線不穩(wěn)；而四氫呋喃作為一種常見的環(huán)醚，易被氧化，對PEEK管路造成損壞，且毒性較強。因此，本研究考慮采用常規(guī)的甲醇或乙腈和水添加一定濃度的酸性改性劑作為流動相，以期實現(xiàn)15種目標物質的分離。

　　采用乙腈和水為流動相進行洗脫時，由于乙腈的洗脫能力較強，實現(xiàn)基線分離較為困難；以甲醇和水為流動相進行洗脫時，洗脫效果明顯好轉，通過梯度條件的優(yōu)化，基本實現(xiàn)全部目標物的分離，但2-苯基苯并咪唑-5-磺酸的色譜峰拖尾嚴重。為了改善目標物的色譜峰形，在流動相中分別添加0. 1%甲酸，結果發(fā)現(xiàn)，2-苯基苯并咪唑-5-磺酸的色譜峰形明顯較未添加酸性改性劑時對稱，且明顯改善了各物質間的分離度。15種紫外線吸收劑的色譜分離譜圖見圖1。

儀器設備

　　Agilent1200高效液相色譜儀

　　在安捷倫1200系列快速高分離LC系統(tǒng)，與常規(guī)HPLC相比，在沒有犧牲分辨率、精密度和靈敏度的前提下，分析速度提高20倍，高分辨率提高60%。安捷倫1200系列快速高分離液相系統(tǒng)可提供最快分析速度、最高分辨率，同時最大限度地保持系統(tǒng)低壓力而設計的。因此，它保留了常規(guī)HPLC儀器和方法的耐用性和工作原理。這種獨特的設計使1200 RRLC成為了一種通用的液相分析流速范圍適合的柱尺寸從1到4.6-mm ID, 10到300-mm柱長，粒度1.5到10μm。