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等溫滴定量熱儀并可測量溶液中分子間的相互作用

http://www.youdasheng.com 檢測通 時間:2014-11-25

【摘要】

馬爾文 MicroCal Auto-iTC200 是一款全自動低容量高靈敏度的等溫滴定量熱儀。 可在一次實驗中對所有結(jié)合參數(shù)進行直接、無標記的溶液內(nèi)測量。。 其應(yīng)用包括表征小分子、蛋白質(zhì)、抗體、核酸、脂類和其它生物分子的分子間相互作用。 它也可用于進行酶動力學(xué)測量。

方案優(yōu)勢

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采用標準

測量類型:親和力(KD)測量類型:焓?H測量類型:熵 ?S測量類型:化學(xué)計量(n)Sample capacity:384(四個96-孔板)Sample tray temperature range:室溫下為4°C ± 2°C樣品量:370μL樣品池容積:200μLInjection syringe volume:40μLInjection volume precision:<1% @ 2μLEquilibration time:< 6 min(從25°C 至 5°C)樣品展示選件:96-孔板Sample capacity:可達 75/24h(SIM)Cell material:鎳基合金樣品池:硬幣形Noise:0.2 ncal/s溫度范圍:2°C ~ 80°C溫度穩(wěn)定性:± 0.00015°C(25°C時)Response time:10s(高反饋)Multiple feedback modes:是(被動、高增益、低增益)電源功率:100-240V, 50/60Hz, 70W重量:91kg尺寸 (寬, 長, 高)::630mm x 350mm x 770mm 運行環(huán)境 Operating temperature (°C):10°C ~28°C濕度::0% ~70% 相對濕度,無冷凝

方法/原理/步驟

  馬爾文MicroCal Auto-iTC200利用等溫滴定量熱法的技術(shù)來測量各種分子相互作用中所涉及到的結(jié)合親和力和熱力學(xué)參數(shù)。

  等溫滴定量熱法(ITC)的原理

  等溫滴定量熱儀測量兩個分子相互作用時發(fā)生的熱量變化。當相互作用的分子由自由狀態(tài)轉(zhuǎn)入束縛狀態(tài)時非共價鍵重新分配和形成,從而導(dǎo)致吸熱或放熱。ITC通過測量結(jié)合配偶體被混合時作用于池加熱器、保持參比池和樣品池零溫差所需的差分電力來監(jiān)測這些熱量變化。

  Prod-autoITC200-1

  ITC系統(tǒng)主要部件示意圖。

  參比池通常注入水。樣品池包括一個結(jié)合配偶體和一個盛裝配體的攪拌注射器。配體按小等分試樣注入樣品池中,直到配體濃度比樣品濃度高出2至3倍為止。每次注入配體都會形成一個熱脈沖與時間結(jié)合,并進行濃度歸一化,以生成kcal/mol對摩爾比(配體/樣品)的滴定曲線。得出的等溫線配合結(jié)合模型,以生成親和力(KD)、化學(xué)計量(n)和相互作用的焓(ΔH)。

儀器設(shè)備

  MicroCal Auto-iTC200集MicroCal iTC200的高靈敏度—量熱儀的核心—和唾手可得的自動化于一身,以滿足繁忙的研究和藥物發(fā)現(xiàn)實驗室的生產(chǎn)力需求。系統(tǒng)直接測量生物化學(xué)結(jié)合過程中釋放或吸收的熱量,然后計算出結(jié)合親和力(KD)、化學(xué)計量(n)、焓(ΔH)和熵(ΔS)。無需將樣品和試劑制備到適宜的濃度,分析開發(fā)過程最少,最快得到初步結(jié)果。

  易用的軟件包括優(yōu)化后的自動化腳本,各種樣品類型和條件都能夠穩(wěn)健地運行。用戶友好的設(shè)計向?qū)Э蓞f(xié)助選擇實驗運行參數(shù)。專業(yè)工具可自動處理數(shù)據(jù),實現(xiàn)快速可靠的分析。

  所有結(jié)合參數(shù)(親和力、化學(xué)計量、焓和熵)只需一次實驗。

  以最少的分析開發(fā)過程快速獲得初步結(jié)果,無標簽、無固定化且無分子量限制。

  出色的數(shù)據(jù)質(zhì)量,可精確到亞毫摩爾到皮摩爾分解常數(shù)(10-2至10-12 M)。

  硬幣形池優(yōu)化了樣品混合。

  非反應(yīng)性鎳基合金具有耐化學(xué)性,與各種生物樣品相容。

  僅用10µg蛋白質(zhì)就可以靈敏地研究任何生物分子的相互作用。

  用戶友好的實驗設(shè)計向?qū)Ш妥詣訑?shù)據(jù)分析功能支持快速可靠的分析。

  樣品呈現(xiàn)在帶溫控的96-孔板上。

  全自動系統(tǒng)配備離開操作功能,提高了生產(chǎn)率。

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