方案優(yōu)勢(shì)

靈敏、準(zhǔn)確和實(shí)用

采用標(biāo)準(zhǔn)

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

方法/原理/步驟

　　目前，常用的黃曲霉毒素檢測(cè)方法主要有薄層色譜法(TLC)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和碘化熒光光度法(SFB)。由于上述方法都有操作繁瑣、實(shí)驗(yàn)過(guò)程長(zhǎng)、精確度低以及直接接觸毒素等缺點(diǎn)，并且由于非常重要的黃曲霉毒素B1和G1的低熒光性，只有黃曲霉毒素B2和G2有其自己的熒光，那么，黃曲霉毒素B1和G1就不得不通過(guò)衍生來(lái)檢測(cè)。通過(guò)光化學(xué)反應(yīng)(如下圖)，黃曲霉毒素B1和G1被羥基化(水解)從而得到穩(wěn)定的可測(cè)熒光。

　　如果通過(guò)加入碘的甲醇衍生劑，通過(guò)質(zhì)譜測(cè)得，碘和甲氧基分別加成到了黃曲霉毒素B1和G1雙鍵兩側(cè)，反應(yīng)形式類似于上述光化學(xué)反應(yīng)，那些其他重要的用于檢測(cè)的黃曲霉毒素B2和G2的化學(xué)性質(zhì)在光化學(xué)反應(yīng)中并不改變，并且B2a和G2a有著區(qū)別于B2和G2的熒光強(qiáng)度。

　　所以食品及飼料越來(lái)越多地采用高效液相色譜柱后衍生法來(lái)檢測(cè)黃曲霉毒素，一個(gè)樣品只需5 min，就能達(dá)到定量準(zhǔn)確、快速檢測(cè)的要求。柱后衍生熒光檢測(cè)具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。

　　檢測(cè)過(guò)程

　　提取：樣品全部磨碎，通過(guò)40目篩，混勻，稱取試樣25.0g(精確到0.1g)于500mL燒杯中，加入5g氯化鈉及125mL甲醇水溶液(體積比3：2)，用均質(zhì)器高速攪拌3min，過(guò)濾。移取20mL濾液到50mL量筒中，并加入20mL水稀釋，攪勻，以玻璃纖維濾紙過(guò)濾1-2次，至濾液澄清，隨即進(jìn)行免疫親和柱(高度富集和純化)凈化操作。

　　凈化：將免疫親和柱連接于10mL玻璃針筒下，準(zhǔn)確移取8mL上述澄清液，注人玻璃針筒內(nèi)，以1-2滴/s的流速全部通過(guò)免疫親和柱。再用10mL水以同樣的流速淋洗柱子兩次，棄去全部流出液。再用1.0mL甲醇淋洗親和柱，洗脫流速為1-2滴/s，將所有樣品淋洗液(1mL)及1.0mL水收集于2mL玻璃測(cè)試瓶中，待測(cè)。

　　色譜條件

　　色譜柱：SMT C18，250mm×4.6mm×5μm

　　色譜柱溫度：室溫

　　流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水溶液(22＋22+56)；

　　流速：1.0mL/min；

　　柱后衍生試劑：0.03%的碘溶液

　　流速：0.3 mL/min

　　衍生化溫度：70℃

　　熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)360 nm，發(fā)射波長(zhǎng)450 nm；

　　進(jìn)樣量：20μL

　　黃曲霉毒素樣品進(jìn)樣液相色譜檢測(cè)，所得圖譜如下圖

　　回收率：≥90%

　　精密度(RSD)：1%~2%

　　線性范圍：0.1-50μg/kg

　　相關(guān)系數(shù)：≥0.9950

　　最低檢出限：0.1mg/kg

　　低于國(guó)家限量規(guī)定

儀器設(shè)備

蘭博series 4060高效液相色譜